Marqueur des cellules germinales

Table des matières

Remerciements Résumé
Résumé en anglais
Table des matières
Abréviations
Partie Introduction
Contexte et problématique de la thèse : l’intérêt de la stérilisation en aquaculture Synthèse bibliographique
Morphogenèse gonadique
Mammifères : formation de la gonade indifférenciée, différenciation testiculaire et ovarienne
Poissons téléostéens
Gènes impliqués dans la gonadogenèse et la différenciation du sexe
Chez les mammifères
Différenciation testiculaire
Sex determination region Y (Sry)
Sry-box 9 (Sox9)
Fiber Fibroblast growth factor 9 (Fgf9)
L’hormone antimüllérienne (Amh)
Les récepteurs à Amh (AmhR2)
Steroidogenic factor 1 (Sf-1)
Différenciation ovarienne
Wingless-related MMTV integration site 4 (Wnt4)
R-spondin-1 (Rspo1)
Forkhead-box-L2 ou Foxl2 et l’aromatase ou cytochrome P450arom ou cyp19a1
Chez les poissons téléostéens
Différenciation testiculaire
Déterminants majeurs du sexe
Sry-box 9 (Sox9)
Doublesex and mab-3 (DM)-related transcription factor1 (Dmrt1)
Gènes codant pour les enzymes impliquées dans la stéroïdogenèse
Hormone antimüllérienne (Amh)
Récepteur à l’amh de type II (AmhR2)
Différenciation ovarienne
Aromatase ou cytochrome P450arom ou cyp19a1
Forkhead-box-L2 (Foxl2)
Importance des cellules germinales et interactions cellules germinales – cellules somatiques
Spécification des cellules germinales primordiales
Modèle de spécification induite des CGPs – exemple de la souris. Induction
Prolifération et migration
Modèle de spécification spontanée des CGPs – exemple poisson-zèbre
Vasa
Marqueur des cellules germinales
Exemple du tilapia du Nil
Rôle des cellules germinales
Cas du poisson-zèbre
Cas des mammifères
Interaction cellules germinales – somatiques
Cellules somatiques
Interactions cellulaires
Cas du médaka
Cas du poisson-zèbre
Cas des mammifères
Apoptose des CG en réponse à un stress environnemental (température) ou chimique
Cas du poisson-zèbre
Cas du pejerrey
Cas des mammifères
Facteurs externes influençant la différenciation et/ou la fertilité de la gonade
Différenciation du sexe : masculinisation et féminisation
Stéroïdes sexuels chez les mammifères et les téléostéens
Voies de synthèse des androgènes et des oestrogènes
Induction d’une inversion sexuelle par les hormones stéroïdiennes appliquées chez les alevins, avant et pendant la différenciation sexuelle.
Induction d’une inversion sexuelle par des inhibiteurs de l’aromatase, appliqués chez les adultes, après la maturation sexuelle.
La température
Chez les mammifères
Chez les poissons
La fertilité/stérilité
Les méthodes de stérilisation utilisées en aquaculture
Les manipulations génétiques : la triploïdisation
Méthodes de stérilisation envisagées en aquaculture
Approche écologique : les températures stérilisantes
Une plante médicinale: la graine de papaye Carica papaya
Méthodes efficaces, mais non autorisées en aquaculture
Transgénèse
Une molécule chimique le busulfan
Présentation de la thèse
Modèle biologique : le tilapia du Nil, Oreochromis niloticus
Taxonomie
Biologie
Comportement de reproduction
La thermosensibilité
Intérêt du contrôle du sexe et de la stérilisation en aquaculture
Intérêt économique et importance du contrôle du sexe, chez le tilapia du Nil
Effet de la température sur la différenciation sexuelle du tilapia
Stérilité et tilapia
Utilisation des manipulations génétiques : la triploïdisation
Utilisation d’une plante médicinale, la graine de papaye Carica papaya
Objectifs du travail
Partie 2 : Matériels et Méthodes
Animaux et expérimentations
Traitements températures des alevins
Traitements températures des juvéniles
Traitements au busulfan sur des alevins et des juvéniles
Administration par injection intra-péritonéale à la dose de 40 mg de busulfan/kg de poids vif Administration par incorporation à l’alimentation aux doses de 40-80-160 mg busulfan/Kg d’aliment Sexage
Extraction des ARN totaux, traitement DNase et Reverse transcription
Extraction des ARN totaux
Traitement DNAse et Reverse transcription
PCR quantitative en temps réel ou qPCR
Analyse histologique des gonades
Analyses immunohistochimiques des protéines Vasa et PCNA
Protocole élaboré sur la plateforme PHIV du CIRAD
Protocole élaboré par Histalim
Essai TUNEL
Protocole élaboré sur la plateforme PHIV
Protocole élaboré par Histalim
Expérimentation busulfan injecté en intra-péritonéal à une dose de 40 mg/kg de poids vif de poissons
Sex-ratio (SR ou phénotype gonadique), Index gonado-somatique (RGS) et survie
Structure cellulaire . Deuxième série d’expérimentation : busulfan dans l’aliment à des doses de 40, 80 et 160 mg/kg d’aliment
Sex-ratio (SR ou phénotype gonadique), Index gonado-somatique (RGS) et survie
Structure cellulaire
Y-a-t-il un impact du busulfan sur les cellules germinales des gonades de tilapias femelles et mâles
Au niveau moléculaire
Profil d’expression du gène Vasa
Profil d’expression du gène amh
Profil d’expression du gène cyp19a1a
Discussion Générale
Conclusion
Bibliographie
Annexes