Classification des Mollicutes

Table des matières

Résumé
Abstract
Remerciements
Abréviations
Liste des figures
Liste des Tableaux
Partie I : Introduction générale
1.Les mycoplasmes
2.Les mycoplasmes des ruminants et les pathologies associées
3.Concepts actuels de la virulence des mycoplasmes
3.1. Adhésion
3.2. Interaction avec le système immunitaire: immunomodulation et échappement
3.3. Le pouvoir cytotoxique
4.Le sécrétome des mycoplasmes
5.Contexte et objectifs de l’étude
Partie II : La recherche d’activité protéasique extracellulaire
1.Contexte et stratégie de recherche
2.Abstract
3.Importance
4.Introduction
5.Materials and methods
6.Results
6.1. Protease activity of mollicutes found in ruminant lungs
6.2. Assessment of extracellular proteolytic activity
6.3. Extracellular caseinolytic activity in defined medium
6.4. Identification of genes potentially coding for proteases in Mmc and Mycoplasma bovirhinis species and tandem mass spectrometry analysis
6.5. Proteases located preferentially in the supernatant
6.6. Identification of caseinolytic proteases by zymography
6.7. Assessment of the extracellular protease activity of predicted S41 peptidases by analysis of mutant strains
6.8. In silico analysis of serine protease CBW53985.1 (MLC_2570)
7.Discussion
8.Supplémentary material
9.References
10.Résultats complémentaires
10.1. Hypothèse sur la cible de la protéase S41
10.1.1. Activité hémolytique
10.1.2. Dégradation de la fibrine
10.1.3. Dissolution de la fibrine
11.Discussion
Partie III : La Production de vésicules extracellulaires par le genre Mycoplasma.
Chapitre 1 : La vésiculation chez les mycoplasmes, preuve de concept
1.Contexte et stratégie de recherche
2.Introduction
3.Matériel et méthodes
4.Résultats
4.1. Analyses des protéines membranaires des vésicules
4.2. Vésiculation et phase de croissance
4.3. Méthode de détection et de quantification relative des VEs
4.4. La production de vésicules, mécanisme actif ?
4.4.1. Choc thermique
4.4.2. Stress antibiotique
4.4.3. Stress pH
4.5. Observation de la formation de vésicules
5.Discussion
Chapitre 2 : Amélioration des conditions de production et purification des vésicules.
1.Contexte et stratégie de recherche
2.Introduction
3.Matériel et Méthodes
4.Résultats
4.1. Recherche de conditions permettant d’éviter la phase de déclin pour la production de vésicules
4.2. Que se passe-t-il en phase de déclin ?
4.3. Purification
4.3.1. Purification sur gradient discontinu
4.3.2. Purification sur gradient continu
4.4. Utilisation du milieu OptiMEM
4.4.1. Production de vésicules en milieu OptiMEM
4.4.2. Comparaison de la production de VEs entre le milieu m-PPLO et optiMEM
5.Discussion
5.1. La recherche de paramètres influençant la production de VEs
5.2. La recherche d’une approche de purification des VEs
Partie IV : Discussion générale